電轉(zhuǎn)操作視頻
? ? ? ?自2019年9月9日HYY自主研發(fā)CellEasyTM低電壓基因電轉(zhuǎn)儀上市以來,得到了廣大老師同學的熱烈反饋,紛紛打來電話咨詢電轉(zhuǎn)儀相關(guān)事項。講座預(yù)約不斷,今天HYY的科研小伙伴用心為大家?guī)砹岁P(guān)于細胞電轉(zhuǎn)的操作視頻及細胞電轉(zhuǎn)詳細步驟。電轉(zhuǎn)儀我們一起用起來吧!
一、操作步驟
檢測前準備工作
試劑耗材:
細胞培養(yǎng)基DMEM或1640、FBS、0.25%胰蛋白酶 (自配,無菌)、PBS (自配,無菌)、電轉(zhuǎn)緩沖液。
測試細胞:根據(jù)實驗分組提前準備好電轉(zhuǎn)需要用到的細胞,每個電轉(zhuǎn)杯需要1×106個細胞。
其他準備:用具準備電轉(zhuǎn)儀器、電轉(zhuǎn)杯(1mm)、電轉(zhuǎn)液、毛細管槍頭、6孔板、倒置熒光顯微鏡、移液器。
二、細胞實驗流程
1、細胞消化,用PBS處理成細胞懸液,計數(shù),離心(1000rpm,5min)棄PBS;
2、850ul電轉(zhuǎn)液重懸107cells,每個電轉(zhuǎn)杯加入的細胞懸液約85uL;
3、細胞懸液中加入質(zhì)粒8.5ug(終濃度10ug/mL),混勻;
4、毛細管槍頭移取85ul到電轉(zhuǎn)杯,從底部加入,保證沒有氣泡,氣泡會影響電轉(zhuǎn)效果;
5、調(diào)好儀器參數(shù),逐個電轉(zhuǎn),電轉(zhuǎn)結(jié)束后迅速加入少量培養(yǎng)基;
6、六孔板中提前加入2ml完全培養(yǎng)基,電轉(zhuǎn)細胞懸液吸出加入到孔板,37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24-48h,觀察熒光蛋白表達,計算電轉(zhuǎn)效率;電轉(zhuǎn)后第2天觀察細胞存活率;
7、依次操作完上述所有樣品;
8、收拾臺面,電轉(zhuǎn)杯及時清洗,儀器歸位。
三、說明書