一、操作步驟
1.檢測前準備工作
試劑耗材：細胞培養(yǎng)基DMEM或1640、FBS、0.25%胰蛋白酶 (自配，無菌)、PBS (自配，無菌)、電轉(zhuǎn)緩沖液。
測試細胞：根據(jù)實驗分組提前準備好電轉(zhuǎn)需要用到的細胞，每個電轉(zhuǎn)杯需要1*105-1*106個細胞。
其他準備：用具準備電轉(zhuǎn)儀器、電轉(zhuǎn)杯（1mm）、電轉(zhuǎn)液、毛細管槍頭、6孔板、倒置熒光顯微鏡、移液器。

二、細胞實驗流程
1. 細胞消化，用PBS處理成細胞懸液，計數(shù)，離心（1000rpm，5min）棄PBS。
2.用850ul CellEasy電轉(zhuǎn)液重懸107cells，每個電轉(zhuǎn)杯加入的細胞懸液約85uL，細胞量為：1*106/電轉(zhuǎn)杯。
3.細胞懸液中加入質(zhì)粒8.5ug(終濃度10ug/mL），混勻。
4.毛細管槍頭移取85ul到電轉(zhuǎn)杯，從底部加入，保證沒有氣泡，氣泡會影響電轉(zhuǎn)效果。
5.調(diào)好儀器參數(shù)，逐個電轉(zhuǎn)，電轉(zhuǎn)結(jié)束后迅速加入少量培養(yǎng)基。
6.六孔板中提前加入2ml完全培養(yǎng)基，電轉(zhuǎn)細胞懸液吸出加入到孔板，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24-48h，觀察熒光蛋白表達，計算電轉(zhuǎn)效率；電轉(zhuǎn)后第2天觀察細胞存活率。
7.依次操作完上述所有樣品。
8.收拾臺面，電轉(zhuǎn)杯及時清洗，儀器歸位。

細胞電轉(zhuǎn)實驗.pdf