1、雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)：

?啟動子與轉(zhuǎn)錄因子相互作用檢測

?轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構(gòu)、行使調(diào)控基因表達(dá)功能的蛋白質(zhì)分子，也稱為反式作用因子。某些轉(zhuǎn)錄因子僅與其靶啟動子中的特異順序結(jié)合，這些特異性的序列被稱為順式因子。轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和順式因子實(shí)現(xiàn)相互結(jié)合，從而對基因的表達(dá)起抑制或增強(qiáng)的作用。熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)是檢測這類轉(zhuǎn)錄因子和其靶啟動子中的特異順序結(jié)合的重要手段。

?

技術(shù)流程：

?

應(yīng)用領(lǐng)域：

潛在啟動子/啟動子核心區(qū)域檢測；

潛在增強(qiáng)子/抑制子等調(diào)控子核心元件檢測；

啟動子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)檢測；

啟動子/增強(qiáng)子與轉(zhuǎn)錄因子的相互作用；

病毒/細(xì)胞相互作用；

藥物等化學(xué)誘導(dǎo)因素對啟動子活性的調(diào)節(jié)（抑制或增強(qiáng)）；

射線等物理誘導(dǎo)因素對啟動子活性的調(diào)節(jié)（抑制或增強(qiáng)）。

?

? ? ? ? miRNA與3’UTR相互作用檢測

?

? ? ?? 可提供含有熒光素酶報(bào)告基因的人、大鼠、小鼠的3' UTR靶標(biāo)克隆，利用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)體外驗(yàn)證miRNA潛在靶基因。miRNAs 與靶基因的3' UTR區(qū)域特異結(jié)合后調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)。當(dāng)3' UTR靶標(biāo)序列融合在一個熒光素酶報(bào)告基因下游并在體外表達(dá)時，miRNA通過與下游3' UTR特異結(jié)合從而調(diào)節(jié)熒光素酶的表達(dá)。最后，通過分析熒光素酶的活性，間接了解miRNA的靶標(biāo)調(diào)控作用和特異性。

?

?

2.?protein -protein互作

Co-IP（Co-Immunoprecipitation）基于抗體和抗原之間結(jié)合的專一性用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法，是研究兩種蛋白在細(xì)胞內(nèi)的相互作用方法。

基本原理是：細(xì)胞在非變性條件下裂解，胞內(nèi)的蛋白通過抗體結(jié)合，以此為餌蛋白，免疫共沉淀調(diào)取與餌蛋白結(jié)合互作的靶標(biāo)蛋白，洗脫得到蛋白產(chǎn)物，用于WB檢測驗(yàn)證或MS（質(zhì)譜）分析

技術(shù)原理：

技術(shù)服務(wù)流程：

1.WB檢測餌蛋白的本底表達(dá)量（抗體特異性及效價(jià)檢測，以及本底餌蛋白的表達(dá)量測定）

2.細(xì)胞裂解，獲取裂解液

3.免疫共沉淀結(jié)合互作蛋白

4.純化獲取結(jié)合蛋白

5.WB檢測或 MS分析

服務(wù)優(yōu)勢：

1.可為客戶定制服務(wù)，做融合表達(dá)（flag，tag，HA等），更加嚴(yán)謹(jǐn)驗(yàn)證與探索細(xì)胞內(nèi)生理狀態(tài)下的結(jié)合與互作，更具說服力

2.設(shè)定不同組別，包括Input組，目的組，陰性組，實(shí)驗(yàn)嚴(yán)謹(jǐn)可靠

3.提供可直接用于文章的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果圖，以及實(shí)驗(yàn)原圖結(jié)果

4.提供完善的實(shí)驗(yàn)報(bào)告，更利于文章的撰寫和申請

適用研究：

1.細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合互作，形成復(fù)合物的調(diào)控模式

2.各種通路及代謝中，蛋白與蛋白的互作結(jié)合調(diào)控

客戶提供：

1.IP級別抗體（>30ug）及目的蛋白信息

2.活細(xì)胞：3-4*10^7

3.新鮮組織：組織量>0.3-0.5g

4.產(chǎn)物WB檢測的抗體（>5-10ug）

輝園苑提供：

1.所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖及原始圖片

2.完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告

3.可直接用于文章使用的處理結(jié)果圖

3. DNA/RNA-protein互作

1)ChIP實(shí)驗(yàn):

染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（Chromatin immunoprecipitation assay, ChIP）：是一種研究體內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子與基因組DNA之間互作結(jié)合的方法。基本原理是活細(xì)胞狀態(tài)下，通過多聚甲醛固定，形成蛋白-DNA復(fù)合物，運(yùn)用超聲（或酶解）方法對染色體隨機(jī)剪切至一定長度范圍，通過免疫共沉淀富集結(jié)合，純化獲取轉(zhuǎn)錄因子蛋白所結(jié)合的啟動子區(qū)域片段，后續(xù)產(chǎn)物可用于Q-PCR檢測驗(yàn)證或測序分析。

技術(shù)原理：

? ? ?

技術(shù)服務(wù)流程：

1.細(xì)胞交聯(lián)固定：多聚甲醛固定活細(xì)胞（或組織）

2.核質(zhì)分離：提取細(xì)胞核，獲取染色質(zhì)

3.超聲破碎：超聲斷裂染色質(zhì)，獲取一定范圍長度的片段

4.免疫共沉淀：獲取DNA與蛋白結(jié)合的特定復(fù)合物

5.解交聯(lián)：解除DNA與蛋白的交聯(lián)狀態(tài)，純化獲取DNA產(chǎn)物

6.Q-PCR檢測或建庫測序

服務(wù)優(yōu)勢：

1.生物信息學(xué)方法，預(yù)測轉(zhuǎn)錄因子蛋白結(jié)合的啟動子基因，以及預(yù)測結(jié)合的特定motif，為客戶提供多選擇信息

2.直接尋找轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的編碼區(qū)上游靶基因，精準(zhǔn)定位調(diào)控基因

3.設(shè)置完整組別，包括Input組，陽性組，對照組，陰性組，實(shí)驗(yàn)更加嚴(yán)謹(jǐn)可靠

4.提供可直接用于文章的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果圖，以及實(shí)驗(yàn)原圖結(jié)果

5.提供完善的實(shí)驗(yàn)報(bào)告，更利于文章的撰寫和申請

適用研究：

1.適用于人，大鼠，小鼠等哺乳動物細(xì)胞的研究，探討與驗(yàn)證體內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子蛋白調(diào)控啟動子的關(guān)系

2.適用于臨床各種組織樣品的探討研究，例：癌組織與癌旁組織，通過ChIP實(shí)驗(yàn)獲取得到的樣品產(chǎn)物DNA，建庫測序獲取調(diào)控的啟動子基因

客戶提供：

1.IP或ChIP級抗體，抗體量>20ug

2.活細(xì)胞：1-2*10^7

3.新鮮組織：組織量>0.1-0.3g

4.驗(yàn)證基因信息

輝園苑提供：

1.WB檢測抗體效價(jià)與特異性結(jié)果圖

2.染色體斷裂圖

3.完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告

4.可直接用于文章使用的處理結(jié)果圖

2)RIP

RIP（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay，RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀）實(shí)驗(yàn)技術(shù)是一種研究細(xì)胞內(nèi)RNA與蛋白的結(jié)合互作實(shí)驗(yàn)技術(shù)，在表觀上研究的是轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控技術(shù)。基本原理是運(yùn)用靶蛋白的抗體，將蛋白與結(jié)合的RNA復(fù)合物調(diào)取獲得，后續(xù)純化得到RNA，用于Q-PCR檢測或高通量測序分析，驗(yàn)證預(yù)測結(jié)合的靶標(biāo)RNA或探索結(jié)合調(diào)控的標(biāo)志物RNA分子

技術(shù)原理：

技術(shù)服務(wù)流程：

1.細(xì)胞裂解，獲取裂解液

2.抗體與磁珠結(jié)合孵育，形成磁珠-抗體復(fù)合物

3.磁珠抗體復(fù)合物與裂解液孵育結(jié)合，捕獲蛋白結(jié)合的RNA

4.純化獲取得到產(chǎn)物RNA

5.Q-PCR檢測驗(yàn)證或高通量測序篩選靶標(biāo)分子

服務(wù)優(yōu)勢：

1.生物信息學(xué)預(yù)測蛋白結(jié)合的序列，對蛋白結(jié)合互作的RNA分子進(jìn)行檢測和驗(yàn)證，可為客戶提供深度研究，探討RBP結(jié)合的RNA motif

2.設(shè)置完整組別，包括Input組，陽性組，對照組，陰性組，實(shí)驗(yàn)更加嚴(yán)謹(jǐn)可靠

3.提供可直接用于文章的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果圖，以及實(shí)驗(yàn)原圖結(jié)果

4.提供完善的實(shí)驗(yàn)報(bào)告，更利于文章的撰寫和申請

適用研究：

1.適用于人，大鼠，小鼠等哺乳動物的研究，探討與驗(yàn)證體內(nèi)蛋白與RNA結(jié)合互作轉(zhuǎn)錄后調(diào)控研究

2.適用于各種RNA的研究，如：mRNA，LncRNA，miRNA，circle RNA等

3.適用于臨床各種組織標(biāo)本的探討研究，例：癌組織與癌旁組織，通過RIP（AG02）實(shí)驗(yàn)獲取得到的樣品產(chǎn)物RNA，高通量測序，篩選靶標(biāo)分子或分子標(biāo)志物

客戶提供：

1.IP或ChIP級抗體，抗體量>20ug

2.活細(xì)胞：8-9*10^7

3.新鮮組織：組織量>1-3g

4.驗(yàn)證基因信息

輝園苑提供：

1.WB檢測抗體效價(jià)與特異性結(jié)果圖

2.完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告

3.可直接用于文章使用的處理結(jié)果圖

3)RNA pull down?

RNA pull down 是一種研究RNA與蛋白結(jié)合互作的實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法，生物體內(nèi)許多功能的核心是RNA與蛋白的結(jié)合來進(jìn)行調(diào)控，如：蛋白的合成，mRNA的組裝，細(xì)胞發(fā)育調(diào)控等。基本原理是：通過體外轉(zhuǎn)錄獲取標(biāo)記的RNA作為探針，與細(xì)胞細(xì)胞裂解液孵育，免疫共沉淀的方法獲取RNA結(jié)合捕獲的蛋白，后續(xù)可通過WB檢測驗(yàn)證結(jié)合蛋白，或通過質(zhì)譜（MS）的方法得到結(jié)合蛋白的信息

技術(shù)原理：

技術(shù)服務(wù)流程：

1.克隆載體的構(gòu)建

2.體外轉(zhuǎn)錄形成標(biāo)記的RNA探針

3.探針與裂解液孵育結(jié)合，形成磁珠-RNA-蛋白復(fù)合物

4.純化獲取蛋白產(chǎn)物

5.WB檢測或MS分析

服務(wù)優(yōu)勢：

1.生物信息學(xué)預(yù)測，分析RNA motif與蛋白的結(jié)合，可通過截?cái)嗯c截短的方式研究結(jié)合的序列信息，為客戶提供深度分析和研究方案

2.設(shè)置完整組別，包括Input組，正義鏈組，反義鏈組，陰性組，實(shí)驗(yàn)更加嚴(yán)謹(jǐn)可靠

3.提供可直接用于文章的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果圖，以及實(shí)驗(yàn)原圖結(jié)果

4.提供完善的實(shí)驗(yàn)報(bào)告，更利于文章的撰寫和申請

適用研究：

各種通路，代謝路徑，分子機(jī)制，細(xì)胞調(diào)控，藥物誘導(dǎo)等方向的調(diào)控研究，尋找或驗(yàn)證RNA結(jié)合的蛋白，如：結(jié)合蛋白為某些轉(zhuǎn)錄因子，代謝過程中的核心酶，通路中的調(diào)控蛋白等

客戶提供：

1.基因信息及轉(zhuǎn)錄本信息（或含目的基因的載體）

2.活細(xì)胞：3-4*10^7

3.新鮮組織：組織量>0.3-0.5g

4.產(chǎn)物WB檢測的抗體（>5-10ug）

輝園苑提供：

1.體外轉(zhuǎn)錄檢測圖，產(chǎn)物銀染膠圖

2.完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告

3.可直接用于文章使用的處理結(jié)果圖