1.原理：

? ? ? ?將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上，載體通過慢病毒包裝被感染到宿主細(xì)胞并整合到宿主染色體中，用載體中所含抗性基因進(jìn)行篩選。得到可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白，或者穩(wěn)定表達(dá)沉默特定基因的細(xì)胞株。

? ? ? ?shRNA細(xì)胞株構(gòu)建原理：短發(fā)卡RNA（shRNA）是可以克隆到表達(dá)載體并表達(dá)短的干擾RNA（sIrna,19-21個(gè)核苷酸的RNA雙鏈）的DNA分子。我們可根據(jù)靶標(biāo)設(shè)計(jì)短發(fā)卡RNA（shRNA）序列并將其克隆島特定載體上。短發(fā)夾RNA是設(shè)計(jì)為能夠形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的非編碼小RNA分子，可通過RNA干擾來抑制基因的表達(dá)。

過表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建原理：通過人工構(gòu)建的方式在目的基因上游加入調(diào)控元件，使基因可以在人為控制的條件下實(shí)現(xiàn)大量轉(zhuǎn)錄和翻譯，從而實(shí)現(xiàn)基因產(chǎn)物的過表達(dá)。

? ? ? ?KO細(xì)胞株構(gòu)建原理：基因敲除是自80年代末以來發(fā)展起來的一種新型分子生物學(xué)技術(shù)，是通過一定的途徑使機(jī)體特定的基因失活或缺失的技術(shù)。通常意義上的基因敲除主要是應(yīng)用DNA同源重組原理，用設(shè)計(jì)的同源片段替代靶基因片段，從而達(dá)到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術(shù)的發(fā)展，除了同源重組外，新的原理和技術(shù)也逐漸被應(yīng)用，比較成功的有基因的插入突變和iRNA，它們同樣可以達(dá)到基因敲除的目的。

2.技術(shù)應(yīng)用

? ? ? ? 需要長期觀察外源基因表達(dá)的作用，進(jìn)行長期藥理學(xué)研究、基因治療研究、遺傳調(diào)控機(jī)制研究或需要進(jìn)行大規(guī)模蛋白合成則需要構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株。

3.實(shí)驗(yàn)流程：

4.結(jié)果展示：

DU145細(xì)胞熒光圖? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? SW480細(xì)胞熒光圖

客戶提供：細(xì)胞株（凍存管/培養(yǎng)細(xì)胞），目的基因的質(zhì)粒/菌株，目的蛋白抗體，目的基因的載體信息、細(xì)胞培養(yǎng)信息

HYY提供：細(xì)胞株兩管凍存管或一瓶復(fù)蘇細(xì)胞，細(xì)胞株構(gòu)建報(bào)告，QPCR鑒定報(bào)告，WB鑒定報(bào)告?