RNA修飾過去的研究基礎(chǔ)是認(rèn)為RNA在核酸結(jié)構(gòu)上的化學(xué)微調(diào)，隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展以及相關(guān)產(chǎn)品化抗體出現(xiàn)，對RNA修飾的研究不只是停留在結(jié)構(gòu)微調(diào)，當(dāng)前發(fā)現(xiàn)RNA修飾在轉(zhuǎn)錄組水平廣泛存在，并且是可逆的動態(tài)調(diào)控狀態(tài)，參與生物進(jìn)程鐘的多方面，包括：細(xì)胞分化、性別決定、腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移、DNA的損傷修復(fù)等生物學(xué)功能，今天帶給大家的是RNA甲基化修飾研究內(nèi)容。RNA甲基化發(fā)生在RNA分子上不同位置的甲基化修飾現(xiàn)象，常見的RNA轉(zhuǎn)錄后修飾方式有6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine，m6A）和5-甲基胞嘧啶（5-methylcytidine，m5C）。

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1、技術(shù)簡介

甲基化RNA免疫共沉淀基于抗體（m6A）特異性結(jié)合甲基化修飾的堿基，以磁珠包被的抗體結(jié)合修飾RNA，通過免疫結(jié)合吸附，純化產(chǎn)物富集甲基化修飾片段，后續(xù)通過高通量測序，在全轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)研究發(fā)生甲基化的RNA區(qū)域，可以是lncRNA、mRNA、circRNA等。

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2、技術(shù)流程

? 細(xì)胞樣品m6A RNA表達(dá)量測定（dot-blot方法）

? 細(xì)胞裂解，獲取總RNA樣本

? M6a抗體IP沉淀結(jié)合與磁珠共價(jià)形成復(fù)合物

? 洗脫純化獲取甲基化修飾的RNA產(chǎn)物

? 高通量測序

? 生物信息學(xué)分析

3、技術(shù)應(yīng)用

?? mRNA修飾

? 轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控

? 轉(zhuǎn)錄和翻譯過程的聯(lián)系

4、應(yīng)用案例

m6A mRNA methylation regulates CTNNB1 to promote the proliferation of hepatoblastoma

作者選取肝母細(xì)胞癌未模型，在細(xì)胞水平研究上調(diào)m6A甲基化修飾和m6A因子，對肝癌HB細(xì)胞的生長、增殖、凋亡的影響，探究得出METTL3作為預(yù)后因子在HB細(xì)胞中起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用，繼而在動物水平，建立NC組和shRNA敲低組，觀察腫瘤形成的大小，闡明METTLL3在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要調(diào)節(jié)作用，表型闡述后進(jìn)一步在表觀遺傳水平，研究分子機(jī)制，通過m6a-Seq和生信分析尋找METTL-3的靶標(biāo)結(jié)合CTNNB1。

客戶提供：

? 僅限人、大鼠、小鼠物種的樣本，細(xì)胞核組織均可；

? 細(xì)胞，數(shù)量1-3x107個(gè)；

? 組織，所需10-30mg。

輝園苑提供：

? 用于m6a甲基化RIP實(shí)驗(yàn)的抗體；

? Dot-blot檢測本底甲基化修飾RNA水平；

? MeRIP免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)；

? 高通量測序及生物信息學(xué)個(gè)性化分析；

? 完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告及原始數(shù)據(jù)結(jié)果。

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Metastasis。