1、實(shí)驗原理

? ? ?熒光素酶（luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的總稱，其中最有代表性的是從甲蟲中分離得到的螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）和從海腎中分離得到的海腎熒光素酶（Renilla luciferase）。由于兩種酶底物和發(fā)光顏色的區(qū)別，且在動物體內(nèi)無內(nèi)源性表達(dá)，使其在雙報告實(shí)驗中得到廣泛應(yīng)用。

螢火蟲熒光素酶在氧氣、ATP和鎂離子同時存在的條件下，催化熒光素氧化，生成氧化熒光素，同時產(chǎn)生黃綠色光，波長540-600nm，一般檢測時選用560nm。

? ? ? 海腎熒光素酶只需要氧氣就可以催化腔腸素氧化產(chǎn)生藍(lán)光，波長460-540nm，一般檢測時選用460nm。

不同于綠色熒光蛋白（GFP）需要一定的光激發(fā)才能發(fā)光，且易淬滅；熒光素酶經(jīng)過反應(yīng)本身就可以自發(fā)熒光，并且只有在底物存在時才能發(fā)光。因此GFP只能用于標(biāo)記或檢測反應(yīng)是否發(fā)生，而熒光素酶報告實(shí)驗卻能通過熒光值定量分析熒光素酶的表達(dá)水平。

2、技術(shù)應(yīng)用

? ? ? miRNA靶基因研究，轉(zhuǎn)錄因子研究，啟動子分析；

3、實(shí)驗步驟

? ? ?1.細(xì)胞鋪板；2.質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染；3.細(xì)胞酶產(chǎn)物裂解；4熒光檢測；5.結(jié)果分析?

4、結(jié)果展示

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客戶提供：細(xì)胞株（凍存株或培養(yǎng)細(xì)胞）及處理用的藥物，細(xì)胞培養(yǎng)基信息，細(xì)胞特殊處理方式

HYY提供：原始圖片、原始數(shù)據(jù)，完整實(shí)驗報告