卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，手術治療及聯合化療為主要治療手段，但晚期卵巢癌的死亡率仍然較高。因此，了解其潛在的致病機制對于開發(fā)新的治療策略和改善患者的總體預后至關重要。FBW7屬于F-box蛋白家族，是Skp1-Cullin-F-box (SCF)泛素連接酶復合體的底物識別成分，介導不同癌基因蛋白的降解。然而，FBW7在卵巢癌中的進展仍然是未知的。

一、研究內容

1、FBW7下調與較差的預后及低水平的m6A修飾相關

卵巢癌組織中，FBW7蛋白和mRNA水平顯著下調，FBW7低表達與較好的預后相關；FBW7是一個抑癌基因，主要調控癌蛋白的泛素化和降解。研究報道，m6A修飾在生理和病理過程中發(fā)揮關鍵作用，隨后研究者選取60例卵巢癌樣本檢測m6A水平。結果表明，FBW7高表達組，m6A水平上調；并且較好的總生存率與較高的m6A水平顯著相關。

2、腫瘤抑制基因FBW7抑制卵巢癌細胞增殖

體內、體外功能實驗表明，過表達FBW7抑制卵巢癌細胞增殖，促進凋亡；干擾FBW7表達，則顯著促進細胞增殖、克隆形成。

3、FBW7誘導YTHDF2泛素化和蛋白酶體降解

為了進一步挖掘FBW7介導的m6A修飾調控機制，通過COIP-MS鑒定FBW7互作蛋白，分析發(fā)現YTHDF2與FBW7相互作用；COIP，免疫熒光染色分析發(fā)現，YTHDF2與FBW7相互作用可能發(fā)生在細胞質。

FBW7是SCF E3泛素連接酶的一個組成部分，為了確定FBW7是否通過相互作用調節(jié)YTHDF2蛋白穩(wěn)定性。研究者將FBW7過表達質粒瞬轉到卵巢癌細胞，YTHDF2蛋白顯著下調；然而，MG132蛋白酶抑制劑處理后YTHDF2蛋白下調被逆轉。另外，放線菌酮處理FBW7過表達細胞，縮短了YTHDF2蛋白半衰期；FBW7促進YTHDF2泛素化介導蛋白降解，調控m6A修飾系統(tǒng)。

4、YTHDF2與FBW7表達及卵巢癌預后呈負相關

YTHDF2作為腫瘤抑制因子FBW7降解的底物，作者進一步研究了兩者的相關性。研究表明，卵巢癌組織中YTHDF2的mRNA和蛋白水平顯著上調，與FBW7表達呈負相關，且YTHDF2高表達與較差的預后相關。

5、癌基因蛋白YTHDF2促進卵巢癌的發(fā)展

體內、體外實驗表明，抑制YTHDF2可以顯著抑制卵巢癌細胞增殖、克隆形成、腫瘤生長，促進凋亡；YTHDF2過表達顯著促進細胞增殖、集落形成，貼壁不依賴性生長；敲除YTHDF2顯著減弱FBW7缺失誘導的細胞增殖和集落形成能力。因此，YTHDF2可能導致卵巢癌的發(fā)生；FBW7通過誘導蛋白降解抑制卵巢癌的發(fā)生，從而降低YTHDF2致癌活性。

6、BMF作為FBW7-YTHDF2級聯效應因子

研究表明，YTHDF2促進m6A修飾轉錄本降解，作者檢測了是否FBW7通過抑制YTHDF2調控細胞m6A修飾。通過LC-MS/MS分析發(fā)現，抑制YTHDF2顯著上調m6A水平；過表達FBW7上調m6A水平，FBW7表達與m6A呈正相關；FBW7介導的m6A豐度調節(jié)依賴于YTHDF2。

RNA-seq分析表明，抑制YTHDF2細胞中，348個基因上調，320個基因下調；meRIP-seq分析YTHDF2抑制細胞及對照，m6A peak主要位于CDS區(qū)，m6A motif序列為GGAC[U/A]，表明在卵巢癌中YTHDF2可能與m6A結合。通過整合分析RNA-seq和m6A-seq結果，YTHDF2抑制細胞中，25個基因有39 peak被上調，其中BMF的peak顯著富集；

進一步證實，YTHDF2敲除顯著上調BMF mRNA表達水并延長其半衰期，說明BMF mRNA可能是YTHDF2降解的靶點。m6A修飾在YTHDF2誘導的mRNA降解中扮演重要作用，是否抑制m6A修飾能夠穩(wěn)定BMF mRNA？甲基化抑制劑DAA處理卵巢癌細胞，BMF mRNA水平顯著上調，表明甲基化對BMF mRNA的降解至關重要。

RIP證明了YTHDF2與BMF的互作。YTHDF2過表達降低了BMF的表達。YTHDF2對細胞增殖和凋亡的影響可以通過恢復BMF表達逆轉。此外，FBW7過表達與YTHDF2下調一樣，顯著誘導BMF mRNA表達，這是由于FBW7降解YTHDF2。此外，FBW7的過表達或敲除YTHDF2增加了BMF pre-mRNA? m6A修飾的水平。FBW7介導的BMF調控依賴于YTHDF2。作者也揭示了在卵巢癌組織中BMF的表達與YTHDF2表達呈負相關，而與FBW7表達呈正相關。上述結果表明，在卵巢癌中,FBW7與YTHDF2相互作用并通過泛素化降解該蛋白，從而促進BMF表達。。

二、小結

FBW7通過拮抗YTHDF2介導的BMF mRNA降解，從而抑制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。該研究表明YTHDF2是潛在的癌癥治療靶標，為靶向治療癌癥提供了新的思路。